Antecedentes: Las células madre mesenquimatosas (CMM) se están probando cada vez más en aplicaciones de terapia celular en humanos. También se pueden aplicar para tratar una variedad de enfermedades en animales, particularmente en ganado, para combatir condiciones inflamatorias y trastornos degenerativos asociados con la edad. Buscamos demostrar la viabilidad de obtener CMM a partir de tejido adiposo y caracterizarlas utilizando ensayos establecidos. Métodos: Se aislaron CMM adiposas bovinas (CMMAdB) utilizando protocolos de digestión de tejido optimizados internamente y se caracterizaron realizando un ensayo de formación de colonias, evaluaciones de crecimiento celular, análisis de marcadores de superficie celular mediante inmunocitoquímica y citometría de flujo, diferenciación osteogénica y adipogénica, y secreción de indoleamina 2,3-dioxigenasa (IDO). Resultados: Nuestros resultados demuestran la viabilidad de la obtención y expansión en cultivo exitosas de CMM a partir de tejidos adiposos bovinos con características distintivas de formación de colonias, diferenciación multilineal in vitro en linajes osteogénicos y adipogénicos, y expresión de marcadores de superficie celular como CD105, CD73, CD90, CD44 y CD166 con expresión negativa de CD45. Las CMMAdB secretaron cantidades significativas de IDO con o sin estimulación de interferón-gamma, lo que indica capacidad para la inmunomodulación. Conclusiones: Informamos sobre un enfoque viable para obtener CMM autólogas derivadas de tejido adiposo que pueden aplicarse como terapia celular adyuvante potencial para la reparación y regeneración de tejidos en ganado. Nuestra metodología puede ser utilizada por laboratorios de terapia celular veterinaria para preparar CMM para el manejo de enfermedades en ganado.