Este estudio tuvo como objetivo evaluar los cambios en la actividad de la alfa-amilasa salival total (TsAA) y de las proteoformas de alfa-amilasa salival no glicosilada y glicosilada (NGsAA y GsAA, respectivamente) en modelos de estrés físico y psicológico, estimados utilizando un método simple y de fácil configuración. El método utilizado fue un ensayo espectrofotométrico con 2-cloro-4-nitrofenil-alfa-D-maltotriosa (CNPG3) como sustrato, incubado con Concanavalina A (ConA) para eliminar la mayor parte de la proteína glicosilada de la muestra. Este método permitió la medición de TsAA y la estimación de las actividades de NGsAA y GsAA con una imprecisión inferior al 10%. Cuando este método se aplicó a dos modelos de estrés diferentes, se observaron diferencias en las respuestas de las proteoformas, siendo la actividad de NGsAA la que mostró cambios de mayor magnitud tras la inducción del estrés en comparación con la actividad de GsAA, y la mayor correlación con la Escala de Inventario de Ansiedad Estado-Rasgo en la Prueba de Estrés Social de Trier (TSST). En conclusión, la actividad de las dos principales proteoformas de sAA se puede estimar fácilmente en saliva, y su medición puede proporcionar información adicional sobre la actividad de TsAA en situaciones de estrés físico o psicológico.