Eptacog alfa (NovoSeven) es un Factor VIIa recombinante dependiente de vitamina K producido por ingeniería genética a partir de células de riñón de hámster bebé (BHK) como una cadena de péptidos única de 406 residuos. Después de la activación, consta de una cadena ligera (LC) de 152 aminoácidos y una cadena pesada (HC) de 254 aminoácidos. El FVIIa recombinante experimenta muchas modificaciones post-traduccionales (PTMs). Las primeras diez ácidos glutámicos de la porción N-terminal están -carboxilados, Asn145 y Asn322 están N-glucosilados, y Ser52 y Ser60 están O-glucosilados. Se realizó un estudio de biosimilaridad cara a cara para el producto original y el primer biosimilar AryoSeven(tm) para evaluar la bioingeniería comparable. Las propiedades fisicoquímicas se analizaron en base a la espectrometría de masas, incluyendo la masa intacta, PTMs y la estructura de orden superior. Ambos biofármacos presentan una variabilidad de lote a lote en sus perfiles de N-glicanos. El análisis de N-glicopéptidos con UHPLC-QTOF-MS confirmó los sitios de N-glicosilación, así como dos sitios diferentes de O-glicopéptidos. Se encontró que Ser60 estaba O-fucosilado y Ser52 tenía motivos de O-glucosa u O-glucosa-(xilosa) como variantes de glicanos. Los datos de espectrometría de movilidad iónica (TWIMS) y de espectroscopía de RMN confirman una similitud cercana de la estructura de orden superior de ambos biológicos. La potencia de los biodrugs se analizó mediante un ensayo de coagulación que demostró una bioactividad comparable. En consecuencia, la optimización cuidadosa del proceso llevó a un proceso de producción estable de los biofármacos.