Los antimicrobianos se utilizan extensamente en las granjas lecheras para prevenir y controlar enfermedades en el ganado. Sin embargo, su uso contribuye a la aparición de bacterias resistentes a antimicrobianos (ARB) y genes resistentes a antimicrobianos (ARG), que pueden ser transmitidos al medio ambiente. El monitoreo regular de la resistencia a antimicrobianos (AMR) es crucial para implementar estrategias de mitigación efectivas. Esta investigación tuvo como objetivo evaluar las especies microbianas ambientales presentes en las granjas lecheras de la provincia de Shandong y caracterizar los perfiles de resistencia a antimicrobianos de los aislados. Se seleccionaron cinco granjas lecheras ubicadas en la provincia de Shandong, representando los patrones de agricultura a gran escala prevalentes en la zona. La recolección de muestras se llevó a cabo de abril a junio de 2022, con un total de 223 aislados recolectados de varios lugares ambientales dentro de cada granja (camas, campo deportivo y sala de ordeño). Se empleó espectrometría de masas por desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-TOF MS) para identificar las especies de los aislados clínicos. Los principales patógenos aislados fueron (5.38%, = 12), (4.93%, = 11) y (4.03%, = 9). Entre los aislados bacterianos, la resistencia a la lincomicina fue la más alta con un 91%, y el 88% eran resistentes a la sulfadiazina. Se detectaron genes de resistencia a antimicrobianos en solo una pequeña proporción de los aislados, siendo el más común . Estos hallazgos destacan la necesidad de una evaluación cuidadosa del uso de antimicrobianos para mantener su efectividad en la medicina humana. Comprender las especies microbianas presentes y sus perfiles de resistencia a antimicrobianos ayuda a enfocar los esfuerzos hacia un uso sostenible de antimicrobianos y a salvaguardar la salud humana.