Perspectivas sobre la Ontogénesis Temprana: Extracción de ARN, Validación de Genes de Mantenimiento y Expresión Transcripcional de Importantes Genes de Células Germinales Primordiales y de Determinación del Sexo
Autores: Bhat, Irfan Ahmad; Dubiel, Milena Malgorzata; Rodriguez, Eduardo; Jónsson, Zophonías Oddur
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Perspectivas sobre la Ontogénesis Temprana: Extracción de ARN, Validación de Genes de Mantenimiento y Expresión Transcripcional de Importantes Genes de Células Germinales Primordiales y de Determinación del Sexo
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Investigación
Transcriptoma
Embriones de salmónidos
Patrón de expresión de ARNm
PGC
Genes SD
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 9
Citaciones: Sin citaciones
El desafío de extraer ARN de alta calidad impide la investigación del transcriptoma de los embriones de salmónidos en desarrollo. Además, el patrón de expresión de ARNm de importantes genes PGC y SD durante el desarrollo embrionario inicial aún no ha sido estudiado. Por lo tanto, en el presente estudio, nuestro objetivo fue aislar ARN de alta calidad de los huevos y embriones en desarrollo para verificar la expresión de genes mediante qPCR. Adicionalmente, se validaron cuatro HKGs para seleccionar el mejor control interno para qPCR. Se extrajo ARN de alta calidad, lo cual fue confirmado por espectrofotometría, electroforesis en gel de agarosa y análisis de Agilent TapeStation. Se eligió un gen de referencia porque mostró menor variación intra e inter-muestra. Los transcritos se expresaron en todas las etapas de desarrollo, mientras que otro se expresó solo hasta 40 grados Celsius. Otro se expresó en etapas posteriores y se mantuvo en su punto máximo por un período más corto, mientras que otro mostró un patrón irregular de expresión de ARNm. Se observó que los niveles de expresión de ARNm de los genes SD estaban regulados al alza durante las etapas posteriores del desarrollo, antes de la eclosión. Este estudio presenta una metodología sencilla para aislar ARN de alta calidad de huevos de salmón, y los perfiles de transcripción resultantes de genes PGC y SD significativos podrían ayudar a mejorar nuestra comprensión del desarrollo reproductivo en esta especie de importancia comercial.
Descripción
El desafío de extraer ARN de alta calidad impide la investigación del transcriptoma de los embriones de salmónidos en desarrollo. Además, el patrón de expresión de ARNm de importantes genes PGC y SD durante el desarrollo embrionario inicial aún no ha sido estudiado. Por lo tanto, en el presente estudio, nuestro objetivo fue aislar ARN de alta calidad de los huevos y embriones en desarrollo para verificar la expresión de genes mediante qPCR. Adicionalmente, se validaron cuatro HKGs para seleccionar el mejor control interno para qPCR. Se extrajo ARN de alta calidad, lo cual fue confirmado por espectrofotometría, electroforesis en gel de agarosa y análisis de Agilent TapeStation. Se eligió un gen de referencia porque mostró menor variación intra e inter-muestra. Los transcritos se expresaron en todas las etapas de desarrollo, mientras que otro se expresó solo hasta 40 grados Celsius. Otro se expresó en etapas posteriores y se mantuvo en su punto máximo por un período más corto, mientras que otro mostró un patrón irregular de expresión de ARNm. Se observó que los niveles de expresión de ARNm de los genes SD estaban regulados al alza durante las etapas posteriores del desarrollo, antes de la eclosión. Este estudio presenta una metodología sencilla para aislar ARN de alta calidad de huevos de salmón, y los perfiles de transcripción resultantes de genes PGC y SD significativos podrían ayudar a mejorar nuestra comprensión del desarrollo reproductivo en esta especie de importancia comercial.