El cambio climático debido al calentamiento global aumenta la susceptibilidad de las plantas a múltiples estrés combinados. La salinización del suelo y el estrés por altas temperaturas que coocurren en regiones áridas/semiáridas restringen severamente el crecimiento y desarrollo de las plantas. Aunque la alfalfa (L.) es un importante pasto forrajero, los mecanismos fisiológicos que impulsan sus respuestas al estrés combinado por sal y calor aún no están claros. Este estudio tuvo como objetivo revelar los mecanismos de respuesta fisiológica y bioquímica de seis cultivares de alfalfa a diferentes estrés al comparar la morfología de las plantas, las características agronómicas, las características fotosintéticas y las respuestas fisiológicas y bioquímicas bajo condiciones de control, estrés por sal (200 mM NaCl), estrés por calor (38 grados C) y estrés combinado por sal y calor. En comparación con los estrés individuales, el estrés combinado inhibió significativamente el crecimiento y la acumulación de biomasa de la alfalfa. Bajo estrés combinado, los cultivares presentaron disminuciones en la altura de la planta y la biomasa fresca total del 11.87-26.49% y 28.22-39.97%, respectivamente, en comparación con las plantas de control. El estrés por calor promovió la fotosíntesis de la alfalfa al aumentar la conductancia estomática, la tasa fotosintética neta y la tasa de transpiración, mientras que el estrés por sal y el estrés combinado suprimieron significativamente estos efectos. El estrés combinado aumentó significativamente la concentración de Na pero disminuyó la de K y el contenido relativo de agua en las hojas de alfalfa. En comparación con los tratamientos de control y estrés individual, el estrés combinado aumentó significativamente el nivel de peroxidación de lípidos de membrana y la acumulación de especies reactivas de oxígeno. Los contenidos de prolina en las hojas de los diferentes cultivares de alfalfa fueron de 2.79-11.26 veces mayores bajo estrés combinado que en el control. El estrés combinado hace que la alfalfa redistribuya energía del crecimiento y desarrollo a las vías de defensa contra el estrés, lo que finalmente conduce a una reducción en la biomasa. Nuestro estudio proporciona una guía teórica para analizar los mecanismos de resistencia de los pastos al estrés combinado por sal y calor.