El hemangiosarcoma esplénico es uno de los tumores malignos más comunes en perros, y el diagnóstico temprano es de gran importancia para lograr un buen pronóstico. La metilación del ADN juega un papel importante en el desarrollo del cáncer. El elemento nuclear intercalado largo 1 es el elemento repetitivo más abundante en el genoma. Se ha demostrado que la hipometilación está relacionada con la carcinogénesis en humanos, y se ha utilizado como un nuevo biomarcador del cáncer. Este estudio tuvo como objetivo evaluar el estado de metilación en el tejido tumoral y el ADN libre de células circulantes y evaluar su significado clínico en el hemangiosarcoma esplénico canino. El ADN genómico se aisló de masas esplénicas de 13 perros con hemangiosarcoma, 11 con otros tumores malignos y 15 con lesiones benignas. La metilación se cuantificó utilizando digestión con enzimas de restricción sensibles e insensibles a la metilación seguida de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Además, se recolectaron muestras de sangre de ocho pacientes para aislar ADN libre de células y determinar los cambios en el estado de metilación durante el curso del tratamiento. La metilación en muestras tumorales fue significativamente más baja en pacientes con hemangiosarcoma que en aquellos con otros tumores malignos y lesiones benignas. Se observaron resultados no significativos pero similares para las muestras de ADN libre de células. Nuestros resultados demuestran que el estado de metilación es un biomarcador potencial para el hemangiosarcoma esplénico.