Los melanomas orales son las neoplasias orales más comunes en los perros y se caracterizan por su naturaleza agresiva, invasividad y mal pronóstico. Con similitudes biológicas y genéticas con los melanomas orales humanos, sirven como un valioso modelo comparativo espontáneo. Los cultivos celulares primarios se utilizan ampliamente en la medicina humana y, más recientemente, en la medicina veterinaria para estudiar la tumorogénesis, la progresión del cáncer y enfoques terapéuticos innovadores. Este estudio tiene como objetivo establecer líneas celulares primarias en dos y tres dimensiones a partir de melanomas orales caninos utilizando aspiración con aguja fina como un método de muestreo mínimamente invasivo. Para este estudio, se recolectaron muestras de seis perros, representadas por cuatro melanomas orales primarios y cinco metástasis en nódulos linfáticos. Las células se digirieron para obtener suspensiones de células individuales, sembradas en frascos o procesadas con Matrigel para formar organoides. Los cultivos celulares se caracterizaron mediante citometría de flujo utilizando anticuerpos contra Melan-A, PNL2 y Sox-10. Esta técnica ofrece un medio mínimamente invasivo para obtener muestras celulares, particularmente beneficioso para pacientes que no son elegibles para procedimientos quirúrgicos, y permite el establecimiento de modelos in vitro cruciales para estudios comparativos en oncología del melanoma mucoso. Hasta donde sabemos, este es el primer trabajo que establece cultivos celulares primarios neoplásicos a través de aspiración con aguja fina en perros.