Se ha demostrado ampliamente que las células multipotentes de la pared vascular están particularmente involucradas en los procesos de remodelación vascular, especialmente al interactuar con las células endoteliales, al contribuir a la estabilización y maduración de los vasos sanguíneos. En el alvéolo mamario, las células de la pared vascular, incluidas las células endoteliales, son cruciales para mantener la barrera sangre-leche al apoyar la función de las células epiteliales mamarias. Considerando que, hasta la fecha, hay una escasez de modelos de co-cultivo en 3D que imiten la estructura glandular mamaria in vivo para especies domésticas, en la presente investigación, describimos un modelo de co-cultivo en 3D donde las células epiteliales mamarias primarias de cerdos minipig de Göttingen fueron co-cultivadas con las dos poblaciones celulares de la pared vascular: las células madre mesenquimatosas y las células endoteliales. Los resultados mostraron que el co-cultivo de las células epiteliales mamarias con las dos poblaciones celulares de la pared vascular llevó a la formación de esferoides multicelulares mamarios más estables con una estructura celular bien organizada, ofreciendo un gran potencial para diversas aplicaciones en la investigación veterinaria, incluyendo la biología de la lactancia y enfoques regenerativos.