Los líquidos iónicos (ILs) han avanzado en una variedad de aplicaciones, incluyendo la espectrometría de masas por desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI-MS). Los ILs pueden ser utilizados como matrices y disolventes para la extracción y separación de analitos antes del análisis mediante espectrometría de masas por desorción/ionización láser (LDI-MS). La mayoría de los ILs muestran una alta estabilidad con una sublimación despreciable bajo vacío, proporcionan una alta eficiencia de ionización, pueden ser utilizados para análisis cualitativos y cuantitativos con y sin estándares internos, muestran una alta reproducibilidad, forman manchas homogéneas durante el muestreo y ofrecen una alta eficiencia de solvatación para una amplia gama de analitos. Los líquidos iónicos pueden ser utilizados como disolventes y fases pseudoestacionarias para la extracción y separación de una amplia gama de analitos, incluyendo proteínas, péptidos, lípidos, carbohidratos, bacterias patógenas y moléculas pequeñas. Este artículo de revisión resume los recientes avances de las aplicaciones de los ILs utilizando MALDI-MS. También se revisan las aplicaciones de los ILs como matrices, disolventes y fases pseudoestacionarias.