La deficiencia de nitrógeno (N) afecta el crecimiento de las plantas y el rendimiento de los cultivos. En este estudio, investigamos el papel de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) en respuesta a la disponibilidad de N en tres cultivares de soja, JINDOU 19 (JD19), LONGHUANG 3 (LH3) y LONGDOU 2 (LD2), que tienen diferentes tolerancias al estrés por bajo contenido de N. Los resultados mostraron que el área foliar y la longitud de la raíz primaria de JD19 y LH3 eran mayores que las de LD2 bajo estrés por bajo contenido de N, lo que sugiere que el crecimiento de JD19 y LH3 estaba menos afectado que el de LD2, y por lo tanto son más tolerantes al estrés por bajo contenido de N que LD2. Interesantemente, la expresión de G6PDH mostró diferentes grados de cambio en estos cultivares de soja bajo condiciones de bajo contenido de N, y la actividad de G6PDH en JD19 y LH3 fue mayor que en LD2. Cuando G6PDH fue inhibida por glucosamina (GlcN), los contenidos de malondialdehído (MDA) y HO aumentaron drásticamente bajo estrés por bajo contenido de N. Mientras tanto, las actividades de enzimas relacionadas con el metabolismo de N fueron inhibidas. Estos resultados indican que G6PDH está involucrada en la tolerancia de los cultivares de soja al estrés por bajo contenido de N al afectar el metabolismo de N. Además, bajo condiciones de bajo contenido de N, los contenidos de NADP y glutatión reducido (GSH) en JD19 y LH3 aumentaron más que en LD2. Por el contrario, la actividad de la membrana plasmática (PM), la NADPH oxidasa y el contenido de NADPH en JD19 y LH3 fueron menores que en LD2. En conclusión, G6PDH reduce la acumulación de ROS en las células vegetales al modular los niveles de NADPH/NADP y GSH para mantener el crecimiento de las plantas de soja bajo condiciones de bajo contenido de N.