La vía de los fosfatos de pentosa (PPP) desempeña un papel esencial en el metabolismo de las células de cáncer de mama para el manejo del estrés oxidativo y la síntesis de nucleótidos. La 6-fosfogluconato deshidrogenasa (6PGD) es una de las enzimas clave de la rama oxidativa del PPP y está involucrada en la biosíntesis de nucleótidos y el mantenimiento del estado redox. Aquí, nuestro objetivo fue analizar la importancia funcional de la 6PGD en un modelo celular de cáncer de mama. La inhibición de la 6PGD en MCF7 redujo la proliferación celular y mostró una disminución significativa en el consumo de glucosa y un aumento en el consumo de glutamina, lo que resultó en una alteración importante en el metabolismo de estas células. No se observó diferencia en los niveles de producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) después de la inhibición de la 6PGD, lo que indica que la 6PGD, a diferencia de la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, no está involucrada en el equilibrio redox. Encontramos que la inhibición de la 6PGD también alteró las características de las células madre y las capacidades de formación de mamásferas de las células MCF7, abriendo nuevas vías para prevenir la recurrencia del cáncer después de la cirugía o la quimioterapia. Además, la inhibición de la 6PGD a través del inhibidor químico S3 resultó en una inducción de senescencia, que, junto con la detención del ciclo celular y la inducción de apoptosis, podría estar orquestada por la activación de p53. Por lo tanto, postulamos la 6PGD como un nuevo objetivo terapéutico para tratar el cáncer de mama.