El problema: El diagnóstico ante-mortem de la enfermedad de Johne, causada por subsp. (MAP), se logra normalmente a través de cultivos fecales, PCR o pruebas serológicas, pero el acuerdo sobre qué muestras son positivas para la enfermedad de Johne suele ser deficiente y las sensibilidades son bajas, particularmente en infecciones en etapas tempranas. La posible solución: Las células micobacterianas contienen mezclas características muy complejas de derivados de ácidos micólicos que provocan anticuerpos durante la infección; esto se ha utilizado para detectar infecciones en humanos. Aquí, exploramos su aplicación en proporcionar un ensayo que diferencie animales infectados de vacunados (ensayo DIVA) para la enfermedad de Johne en ganado. Método: Se midieron las respuestas de anticuerpos a diferentes clases de derivados de ácidos micólicos utilizando ELISA para suero de ganado positivo para MAP tanto por PCR fecal como por ELISA comercial de suero, o solo por PCR, y de animales de rebaños sin historial de enfermedad de Johne, reactores de tuberculosis bovina, vacunados con BCG, vacunados e infectados con BCG, y animales vacunados con Gudair. Resultados: Los antígenos de mejor rendimiento, ZAM295 y ST123-este último una molécula presente en las células de MAP pero no de-lograron una sensibilidad del 75% y 62.5%, respectivamente, para suero de animales positivos por PCR fecal y un ELISA comercial de suero MAP, con una especificidad del 94% en comparación con 80 negativos sin historial. Combinar los resultados de ensayos separados con dos antígenos (ST123 y JRRR121) aumentó la sensibilidad/especificidad a 75/97.5%. En los mismos puntos de corte, los animales vacunados con vacunas Gudair o BCG y los reactores de bTB mostraron una especificidad similar. La especificidad en animales vacunados con BCG pero infectados cayó al 85%. Combinar los resultados de dos antígenos dio una sensibilidad/especificidad de 37.5/97.5% para el conjunto completo de 80 muestras positivas por PCR, detectando 30 positivos en comparación con 16 para IDEXX. Conclusión: ELISA de suero utilizando lípidos sintéticos distingue de manera efectiva entre muestras de ganado negativas para MAP y aquellas positivas tanto por PCR como por un serodiagnóstico comercial de MAP, sin interferencia de la vacunación con Gudair o BCG. Identificó casi el doble de positivos por PCR que el serodiagnóstico comercial, ofreciendo la posibilidad de una detección más temprana de la infección.