La presencia de antimonio (Sb) en altas concentraciones en el medio ambiente se reconoce como un problema emergente a nivel mundial. Se conoce la toxicidad del Sb en los tejidos vegetales; sin embargo, se deben abordar nuevos métodos para mejorar la tolerancia de las plantas. Aquí, se cultivó callo de álamo (L. var. pyramidallis) expuesto a Sb(III) en una concentración de 0.2 mM y/o a silicio (Si) en una concentración de 5 mM in vitro para determinar el impacto de la interacción Sb/Si en el tejido. Se investigaron la absorción de Sb y Si, el crecimiento, la actividad de la superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), guaiacol-peroxidasa (G-POX), las concentraciones de nutrientes y las concentraciones de pigmentos fotosintéticos. Para elucidar la acción del Si durante el estrés inducido por Sb, se determinó el impacto de cultivos cortos y largos. El silicio disminuyó la acumulación de Sb en los callos, independientemente de la duración del cultivo (aproximadamente un 34%). El antimonio redujo la biomasa del callo (aproximadamente un 37%) y disminuyó las concentraciones de pigmentos fotosintéticos (hasta un 78.5%) y nutrientes en el tejido (hasta un 21.7%). El silicio apoyó la tolerancia de la planta al Sb mediante la modificación de la actividad de las enzimas antioxidantes, lo que resultó en una mayor producción de biomasa (aumentada en aproximadamente un 35%) y una mayor absorción de nutrientes del medio (aumentada en aproximadamente un 10%). El silicio ayudó al desarrollo de la tolerancia al Sb durante el período de cultivo más largo. Estos resultados son clave para entender la acción de la tolerancia desarrollada por el Si contra los metaloides.