El paso de iniciación de la replicación en los orígenes de replicación determina cuándo y dónde en el genoma se generan las máquinas de replicación, los replisomas. Un control estricto de la iniciación de la replicación ayuda a facilitar las dos tareas principales de la replicación del genoma: duplicar el genoma de manera precisa y exactamente una vez en cada ciclo de división celular. La regulación de la iniciación de la replicación debe asegurar que la iniciación ocurra durante la fase S específicamente, que ningún origen se active más de una vez por ciclo celular, que se activen suficientes orígenes para evitar huecos no replicados y que los orígenes correctos se activen en el momento adecuado, pero solo en circunstancias favorables. A pesar de su importancia para la homeostasis genética, solo se comprenden los principales procesos moleculares de la iniciación de la replicación eucariota y su regulación celular. La proteína MTBP (proteína unida a Mdm2) es hasta ahora el último factor central de iniciación de la replicación identificado en células metazoarias. MTBP es el ortólogo de Sld7 de levadura. Es esencial para la activación de orígenes, la maduración de complejos pre-replicativos (pre-RCs) en replisomas y está emergiendo como un foco de regulación dirigido por quinasas y por degradación regulada. Presentamos una visión reciente sobre la estructura y función celular de la proteína MTBP a la luz de estudios estructurales y bioquímicos recientes que revelan detalles moleculares críticos de la reacción de activación de orígenes eucariotas. Cómo se conectan mutuamente los roles de MTBP en la replicación y otros procesos celulares y cómo se relacionan con la contribución de MTBP a la tumorogénesis sigue siendo en gran medida incierto.