El glioblastoma es un tumor cerebral, caracterizado por resistencia recurrente o innata a la quimiorradioterapia convencional. Se han propuesto nuevas moléculas naturales y fitoextractos como adyuvantes para sensibilizar la respuesta a la Temozolomida (TMZ). En este estudio, investigamos el efecto del extracto de GS en células de glioblastoma humano U87Mg. Según los valores de IC50, el extracto de GS mostró una citotoxicidad significativa. Esto fue confirmado por la inhibición del crecimiento celular y la alteración en la actividad metabólica evaluada mediante el recuento celular y el ensayo de MTT. GS indujo una reducción en Pro-caspasa 9, 3, pero no en la escisión de PARP ni en la fragmentación del ADN. Así, en la citotoxicidad inducida por GS, la muerte celular no está asociada con la apoptosis. En este contexto, el tratamiento a corto plazo de las células U87Mg con extracto de GS (1 mg/mL) redujo los niveles de fosforilación de mTOR y de su objetivo descendente P70 S6 quinasa, destacando el papel del extracto de GS en la inducción de la autofagia. La activación del flujo autofágico por el extracto de GS fue confirmada por análisis de Western blot, que reveló la reducción en p62 y el aumento concomitante en la relación LC3B II/I. La inmunofluorescencia evidenció la acumulación de punteados de LC3B en células U87Mg pretratadas con el inhibidor de autofagia Bafilomicina A1. Además, como principales reguladores clave de la muerte celular programada tipo II, también se investigaron p53, p21 y CDK4, los cuales fueron inhibidos por el tratamiento con GS. En conclusión, el extracto de GS podría considerarse como un inductor de autofagia en células de glioblastoma U87Mg.