El cáñamo industrial (L., familia Cannabaceae) es un cultivo de múltiples usos, utilizado en la producción de alimentos, nutracéuticos, cosméticos y medicamentos. Por lo tanto, el desarrollo de nuevas variedades con perfiles químicos específicos es necesario. Los métodos de cultivo in vitro podrían ser complementarios a la cría convencional y una herramienta útil para la propagación a gran escala. La fuerte dominancia apical se considera uno de los factores que contribuyen a la recalcitrancia del cáñamo industrial en la proliferación de brotes. En este estudio, se probaron los inhibidores del transporte polar - ácido -naftilftálmico (NPA) y ácido 2,3,5-triiodobenzoico (TIBA) para mejorar la regeneración de brotes como resultado de la supresión de la dominancia apical y desarrollar protocolos in vitro para las variedades Diana, Finola y Fedora 17. Las puntas de los brotes derivados de epicotilos se cultivaron en medio de Murashige y Skoog (MS) suplementado con meta-topolin (mT) y NPA, y también tidiacurón (TDZ) con una combinación de TIBA y NPA. Los resultados mostraron que la combinación de TDZ con NPA (1-5 mg L) y TDZ con TIBA (0.5-2.5 mg L) aumentaron la respuesta de los explantes y la tasa de multiplicación, pero el efecto fue dependiente del genotipo y se observaron malformaciones. Para optimizar el protocolo desarrollado, se aplicó un procedimiento de dos pasos con un tiempo de exposición reducido a los inhibidores y concentraciones reducidas de los mismos. Los brotes se enraizaron en medios que contenían ácido indolbutírico (IBA) y luego se aclimataron con éxito. Los resultados obtenidos serán útiles en la micropropagación de variedades de cáñamo industrial recalcitrantes.