El colesterol exógeno se ha suplementado en los piensos acuáticos debido a las proporciones reducidas de harina de pescado y aceite de pescado. Este estudio tuvo como objetivo investigar los efectos de la suplementación dietética de colesterol en la lipidómica muscular de dos especies de peces marinos, el rodaballo y el pez globo tigre. Se llevó a cabo un ensayo de alimentación de 70 días, donde se utilizaron dos dietas con bajo contenido de harina de pescado suplementadas con 0 o 1% de colesterol. El análisis lipidómico con espectrometría de masas en tándem dirigida mostró que, en el rodaballo, un total de 49 lípidos individuales exhibieron diferencias significativas en su abundancia en respuesta al colesterol dietético, mientras que el número fue de 30 para el pez globo tigre. El colesterol dietético aumentó la abundancia de colesterol y éster de colesterol en ambas especies. En el rodaballo, el colesterol dietético también aumentó la abundancia de triacilglicerol y acilcarnitina, mientras que en el pez globo tigre, reguló principalmente la abundancia de fosfolípidos y BMP. Esta fue la primera vez que se investigaron las respuestas de la lipidómica muscular de peces marinos a la suplementación dietética de colesterol.