El nitrógeno nitrato (NO-N) se utiliza ampliamente en el cultivo del pepino (L.). De hecho, en formas de nitrógeno mixtas, sustituir parcialmente NO-N por NH-N puede promover la absorción y utilización del nitrógeno. Sin embargo, ¿sigue siendo así cuando la plántula de pepino es vulnerable al estrés por temperatura subóptima? No está claro cómo la absorción y el metabolismo de amonio afectan la tolerancia a temperaturas subóptimas en plántulas de pepino. En este estudio, las plántulas de pepino se cultivaron a temperaturas subóptimas con cinco proporciones de amonio (0NH, 25%NH, 50%NH, 75%NH, 100%NH) durante 14 días. En primer lugar, aumentar el amonio al 50% promovió el crecimiento y la actividad radicular y aumentó los contenidos de proteínas y prolina, pero disminuyó el contenido de MDA en las plántulas de pepino. Esto indicó que aumentar el amonio al 50% mejoró la tolerancia a temperaturas subóptimas de las plántulas de pepino. Además, aumentar el amonio al 50% reguló al alza la expresión de los genes de absorción y transporte de nitrógeno, lo que promovió la absorción y el transporte de nitrógeno, así como la regulación al alza de la expresión de los genes del ciclo del glutamato, que promovieron el metabolismo del nitrógeno. Mientras tanto, el aumento de amonio reguló al alza la expresión de los genes PM H-ATP en las raíces, lo que mantuvo el transporte de nitrógeno y las membranas a una temperatura subóptima. Además, 13 de los 16 genes detectados en el estudio se expresaron preferentemente en las raíces en los tratamientos de aumento de amonio bajo temperaturas subóptimas, lo que, por lo tanto, promovió la asimilación de nitrógeno en las raíces para mejorar la tolerancia a temperaturas subóptimas de las plántulas de pepino.