La caña de azúcar ( spp.), un cultivo comercial importante que es una fuente significativa de azúcar y bioetanol, está fuertemente influenciada por los impactos de estrés biótico y abiótico. El intrincado genoma poliploide y aneuploide de la caña de azúcar ha mostrado varios límites para las estrategias de cría convencionales. No obstante, la ingeniería biotecnológica actualmente ofrece la mejor oportunidad de introducir características agronómicas comercialmente significativas. En este estudio, se desarrolló un sistema de transformación mediada eficiente que utiliza el gen CP4-EPSPS resistente a herbicidas como marcador de selección. Notablemente, todas las plantas que fueron identificadas por PCR como transformantes mostraron una resistencia significativa a herbicidas. Además, este protocolo de transformación también destacó: (i) el alto rendimiento de líneas transgénicas a partir de callos (cada gramo de callos generó seis líneas transgénicas); (ii) una mejor selección; y (iii) una mayor eficiencia de transformación. Este protocolo proporciona una herramienta confiable para un procedimiento rutinario para la generación de plantas de caña de azúcar resilientes.