Las células germinales primordiales (PGCs) juegan un papel crucial en la preservación de los recursos genéticos avícolas y en la realización de investigaciones transgénicas. En este artículo se estableció un sistema para la aislamiento rápido de PGCs a partir de sangre embrionaria de pollo. Encontramos que las PGCs pueden migrar a la capa inferior de los fibroblastos embrionarios de pollo (CEFs) a través de poros más pequeños que su diámetro, mientras que las células sanguíneas no pueden, cuando se co-cultivan con CEFs de pasajes dos a tres. Basándonos en las características de las PGCs, desarrollamos un nuevo método de aislamiento de PGCs (método de inserción de cultivo celular/adherencia de CEF) que utiliza una inserción de cultivo celular de 3 m y CEFs de pasajes dos a tres. Usando este método, se pueden aislar aproximadamente 700 PGCs de la sangre de un solo embrión de pollo en la etapa 17 de desarrollo de Hamburger y Hamilton (H&H). La tasa de separación alcanzada fue del 87.5%, con una pureza de separación del 95%. La tasa de separación de este método fue un 41.4% más alta que la del método común de centrifugación en gradiente de densidad de Percoll y un 33.6% más alta que la lisis con el tampón ACK. Las PGCs aisladas de la sangre embrionaria pudieron proliferar 37 veces en 2 semanas cuando se cultivaron en un sistema de cultivo sin alimentadores. También continuaron expresando las proteínas y retuvieron la capacidad de migrar in vivo. En general, las PGCs separadas utilizando el método de inserciones de cultivo celular/adherencia de CEF retienen sus características de células madre y capacidad de migración. Las PGCs también exhiben una buena eficiencia de proliferación, lo que las hace adecuadas para experimentos transgénicos posteriores o para la preservación de recursos genéticos.