Las pruebas de digestibilidad in vitro son esenciales para la evaluación del valor nutricional de forrajes y piensos, pero necesitan líquido ruminal recolectado de animales como inóculo para ser realizadas. Sin embargo, se sabe que la capacidad degradativa del líquido ruminal puede fluctuar dependiendo del animal y del momento de la recolección, probablemente como función de las poblaciones de microbios del rumen. Se espera que la actividad enzimática expresada por los microbios represente el potencial degradativo del líquido ruminal. Los objetivos del presente estudio fueron investigar los efectos del animal y del tiempo y el intervalo de muestreo en las poblaciones de microbios del rumen y el potencial degradativo, así como investigar la relación entre diferentes características del rumen. Los microbios del rumen diferían según el animal y la semana, pero no según el momento del día. Los indicadores de función del rumen no se vieron afectados por el animal y solo algunos metabolitos menores de los microbios mostraron variaciones durante el día. La actividad enzimática fue más variable dependiendo del animal y del tiempo, lo que indica la necesidad de mezclar líquidos ruminales y replicar el análisis para obtener resultados confiables.