El objetivo de este estudio fue desarrollar un modelo in vitro que imite las reacciones inflamatorias y la formación de trampas extracelulares de neutrófilos (NETs) por leucocitos polimorfonucleares (PMNs) en vacas lecheras. Este modelo se utilizó para examinar el efecto del carprofeno (CA) sobre la formación de NETs inducida por lipopolisacáridos (LPS) y la expresión de factores inflamatorios. Se recolectaron muestras de sangre periférica de 24 vacas Holstein (3-11 días posparto) y se aislaron los PMNs. En tres réplicas, los PMNs fueron expuestos a varios tratamientos para establecer un modelo in vitro apropiado, incluyendo 80 g/mL de LPS durante 2 h, seguido de una co-incubación durante 1 h con 60 mol/L de CA y 80 g/mL de LPS. Los efectos de estos tratamientos se evaluaron mediante la evaluación de la formación de NETs a través de la liberación de ADN extracelular, la expresión génica de citoquinas proinflamatorias, la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y la expresión de proteínas relacionadas con NETs, incluyendo histona 3 (H3), histona citrulinada (Cit-H3), catepsina G (CG) y peptidil arginina deiminasa 4 (PAD4). La evaluación de estos parámetros esclarecería el mecanismo específico por el cual el CA inhibe la formación de NETs a través de la vía PAD4 en lugar de modular la vía Nox2. Esto resalta el efecto del CA en la descondensación de la cromatina durante la formación de NETs. Se realizaron análisis estadísticos utilizando ANOVA de una vía con corrección de Bonferroni. Los resultados demostraron que el LPS llevó a una formación elevada de NETs, mientras que el CA mitigó la mayoría de estos efectos, concurrentemente el nivel de proteína PAD4 aumentó con la estimulación de LPS y disminuyó después de la administración de CA. Sin embargo, los niveles intracelulares de ROS no cambiaron en presencia de LPS. La suplementación con LPS resultó en una regulación al alza de los niveles de expresión de proteínas H3 y Cit-H3. Por el contrario, la administración de CA inhibió su expresión. Además, no hubo cambios en la expresión de CG ni con LPS ni con la co-estimulación LPS + CA. La expresión génica de citoquinas proinflamatorias (factor de necrosis tumoral - alfa, interleucina (IL)-18, IL-1beta e IL-6) se reguló al alza con la estimulación de LPS, mientras que el tratamiento con CA inhibió este fenómeno. En conclusión, el CA demostró un pronunciado efecto inhibitorio tanto en la formación de NETs inducida por LPS como en la respuesta inflamatoria asociada.