Las barreras geográficas influyen en la distribución de las especies y desempeñan un papel importante en la segregación de los ensambles ícticos. El presente estudio busca evaluar la influencia de una pequeña barrera natural en la distribución espacial de las especies ícticas en el río Verde, cuenca alta del río Paraná, Brasil, considerando dos biotopos: aguas arriba y aguas abajo de la Cascada Branca. Se observó la mayor riqueza de especies aguas abajo de la Cascada Branca, que también presentó el mayor número de especies exclusivas. La riqueza, la uniformidad y la abundancia variaron significativamente entre los biotopos. La composición y la estructura del ensamble íctico difirieron entre los biotopos, que se caracterizaron por diferentes especies indicadoras, principalmente aguas abajo de la Cascada Branca. Las variables físicas y químicas, así como la distancia geográfica entre los sitios, no fueron responsables de las diferencias observadas. Por lo tanto, el presente estudio demuestra que las pequeñas barreras también pueden ser cruciales en la estructuración de la ictiofauna y desempeñar un papel clave en la segregación de los ensambles ícticos.