El desarrollo de materiales con propiedades bioregenerativas es de vital importancia para las terapias de pulpa vital y los procedimientos endodónticos regenerativos. El objetivo de este estudio fue evaluar la citocompatibilidad y citotoxicidad de un nuevo biomaterial endodóntico, PulpGuard, en comparación con otros dos biomateriales ampliamente utilizados en procedimientos endodónticos, ProRoot Mineral Trioxide Aggregate (MTA) y Biodentine. Métodos: Se aislaron células de papila apical (APCs) de terceros molares con rizogénesis incompleta de pacientes con indicación ortodóntica para extracción dental. Las APCs cultivadas se incubaron durante 24, 48 o 72 h con diferentes diluciones de eluatos preparados a partir de los tres materiales. La viabilidad celular, movilidad y proliferación se evaluaron in vitro utilizando el ensayo Alamar Blue y una prueba de cicatrización de heridas. Las células también se cultivaron en contacto directo con la superficie de cada material. Estos fueron analizados mediante Microscopía Electrónica de Barrido (SEM), y la composición química superficial se determinó mediante Espectroscopía de Dispersión de Energía (EDS). Resultados: Las células incubadas en presencia de eluatos extraídos de ProRoot MTA y PulpGuard presentaron tasas de viabilidad comparables a las de las células de control; en contraste, los eluatos de Biodentine no diluidos indujeron una reducción significativa de la viabilidad celular. El ensayo de cicatrización de heridas reveló que los eluatos de ProRoot MTA y PulpGuard permitieron una migración y proliferación celular sin obstáculos. Se observó adhesión celular en la superficie de todos los materiales probados. Consistente con su composición divulgada, el análisis EDS encontró alta abundancia relativa de calcio en Biodentine y ProRoot MTA y alta abundancia de silicio en PulpGuard. También se encontraron cantidades significativas de zinc y calcio en los discos de PulpGuard. En cuanto a la solubilidad, Biodentine y ProRoot MTA presentaron una leve pérdida de peso después de la extracción del eluato, mientras que los discos de PulpGuard mostraron una significativa absorción de agua. Conclusiones: PulpGuard mostró un buen perfil de citocompatibilidad in vitro y no afectó significativamente las tasas de proliferación y migración de las APCs. Las células cultivadas en presencia de eluatos de PulpGuard mostraron un perfil similar al de aquellas cultivadas con eluatos del cemento endodóntico ampliamente utilizado ProRoot MTA.