(1) Antecedentes: Las plantas L. constituyen una rica fuente de compuestos bioactivos. La síntesis de compuestos bioactivos en las plantas a menudo se desencadena por la activación del metabolismo secundario, que puede ser inducido por elicitores bióticos o abióticos. In vitro, el efecto de los elicitores puede estudiarse en un ambiente controlado y en un espacio pequeño, independientemente de las variaciones estacionales. Las citoquininas se utilizan frecuentemente en el cultivo de tejidos de plantas para la regeneración de yemas, ramificación y elongación de brotes debido a su papel en la mejora de la división celular. Este estudio tuvo como objetivo investigar los efectos de diferentes citoquininas en los parámetros de crecimiento, el contenido total de (polifenoles) y la capacidad antioxidante de las plantas de lúpulo cultivadas in vitro para evaluar la biomasa derivada del lúpulo in vitro como una fuente potencial de compuestos bioactivos. (2) Métodos: se cultivaron explantes de lúpulo unimodal (variedades Cascade y Columbus) en medios enriquecidos con cuatro citoquininas (cinetina, 6-benzilaminopurina, meta-topolina y 6-(,-dimetilalilamina)-purina) en cuatro concentraciones. (3) Resultados: Se encontró una respuesta dependiente del genotipo a diferentes citoquininas. (4) Conclusiones: Los explantes de Columbus pudieron enraizar en medios de cultivo sin auxinas, proporcionando valiosas oportunidades para viveros comerciales. Además, se confirmó que las citoquininas son elicitores valiosos para estimular la biosíntesis de compuestos bioactivos en plantas de lúpulo micropropagadas, convirtiéndolas en una fuente valiosa para diversas industrias.