El (berro de jardín) es una planta perenne que pertenece a la familia que produce dos glucosinolatos (GLs) dominantes: glucorafanina (GRN) y sinalbina (SBN). Representan la forma almacenada, que se convierte, tras la actividad de hidrólisis de la mirosinasa (Myr), en compuestos activos, principalmente isotiocianatos (ITCs) como el sulforafano (SFN) o el isotiocianato de -hidroxibenzilo (pHBITC). La investigación sobre los ITCs que han demostrado propiedades anticancerígenas, antimicrobianas y quimioprotectoras se lleva a cabo generalmente con compuestos puros disponibles comercialmente. Sin embargo, estos son químicamente reactivos, lo que dificulta su uso directo con fines preventivos en suplementos dietéticos. Actualmente se están realizando esfuerzos para preparar suplementos dietéticos enriquecidos con GLs y/o Myr. En este estudio, informamos sobre un procedimiento cromatográfico simple pero eficiente para la aislamiento y purificación de GLs del extracto de MeOH de berro de jardín, basado en una combinación de cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de permeación en gel en DEAE-Sephadex A-25 y Sephadex LH-20. Para obtener la Myr necesaria para la hidrólisis eficiente de los GLs en ITCs antibacterianos, desarrollamos un método rápido para su extracción de las semillas de (berro de jardín). Los rendimientos de GLs fueron 22.9 +/- 1.2 mg GRN (pureza 96%) y 10.4 +/- 1.1 mg SBN (pureza 92%) de 1 g de material vegetal seco. Ambos GLs purificados se utilizaron como sustratos para la Myr. El análisis de la composición de los productos de hidrólisis (HPs) reveló diferencias en sus tasas de hidrólisis y en el grado de conversión de GLs a ITCs individuales catalizados por Myr. Cuando se rompieron los GRNs, se formaron SFNs en una proporción equimolar, pero la formación de pHBITCs fue solo la mitad de la de los SBNs rotos. La disminución en el contenido de pHBITC se debe a su inestabilidad en comparación con el SFN. Mientras que el SFN es estable en medios acuosos durante la medición, el pHBITC sufre hidrólisis no enzimática a alcohol -hidroxibenzílico e iones tiocianato. Las pruebas de los efectos antimicrobianos de los HPs formados a partir de GRN por Myr en condiciones de premix o in situ mostraron inhibición del crecimiento de microorganismos procariontes y eucariontes modelo. Esta observación podría servir como punto de partida para el diseño de una mezcla de dos componentes, basada en GLs purificados y Myr que sea utilizable en la industria alimentaria o farmacéutica en el futuro.