La actividad enzimática juega un papel importante en los procesos bioquímicos del suelo y es un factor clave que impulsa el ciclo de nutrientes. Aunque un gran número de estudios han examinado los efectos del enriquecimiento de nitrógeno (N) y la adición de agua (W) en la actividad enzimática del suelo, la mayoría de ellos se centraron en el efecto de solo un recurso y se basaron en investigaciones a corto plazo. Los efectos separados e interactivos de los cambios a largo plazo en nitrógeno y agua en la actividad enzimática del suelo siguen siendo en gran medida inexplorados. En este estudio, demostramos las respuestas de dos tipos de enzimas del suelo, beta-1,4-glucosidasa (BG) y fosfatasa ácida (APA), al aumento de nitrógeno y agua basados en un experimento de 16 años realizado en un pastizal típico en el norte de China. Los resultados muestran que: (1) la adición de nitrógeno inhibió BG y APA en 2019 y 2020; (2) la adición de agua no tuvo un efecto significativo en la actividad de BG, pero redujo significativamente la actividad de APA en 2020; y (3) el análisis de redundancia (RDA) mostró que la adición de nitrógeno y agua afectó principalmente la actividad enzimática del suelo al afectar el carbono de la biomasa microbiana del suelo (MBC). La presente investigación ofrece una explicación comprensiva de cómo la deposición de nitrógeno atmosférico y los patrones de precipitación afectan las características de los microorganismos y el ciclo de nutrientes en los ecosistemas de pastizales.