La ecología trófica de la ictiofauna en un arroyo puede estar relacionada con la presencia o ausencia de vegetación riparia y acuática, y principalmente con la disponibilidad de recursos. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue analizar las variaciones estacionales y ontogenéticas de la ecología trófica de Hemigrammus marginatus en el arroyo Beija-Flor, ubicado en la Estación Ecológica Jataí, municipio de Luiz Antônio-SP, Brasil. Para lograr este objetivo, se realizaron recolecciones de datos mensuales entre agosto de 2011 y julio de 2012. Los peces se recolectaron mediante una red de arrastre y trampas de cebo en tres estaciones de recolección distribuidas a lo largo del arroyo Beija-Flor. La calidad del agua se evaluó mediante variables químicas: amoníaco, nitrato, nitrógeno total, fósforo total, temperatura física, oxígeno disuelto, pH, turbidez y conductividad, obtenidas mediante una sonda Yellow Springs. Los especímenes recolectados se fijaron en formalina al 10% en campo y se sometieron a mediciones biométricas en el laboratorio. Los estómagos se pesaron y se transfirieron a alcohol al 70%, y el contenido estomacal se analizó con un estereomicroscopio al nivel taxonómico más bajo posible. La especie se consideró insectívora y los alimentos autóctonos fueron los más importantes durante la estación seca, principalmente de los órdenes Ephemeroptera y Trichoptera, mientras que los alimentos alóctonos del orden Hymenoptera fueron más importantes en la estación lluviosa. La dieta de los individuos jóvenes se basó en el consumo de zooplancton y, a medida que el pez se desarrolla, se observó una disminución de este alimento, lo que demuestra que la especie presenta cambios ontogenéticos en su dieta. El estado de conservación del arroyo Beija-Flor, así como la flexibilidad en el uso de los alimentos y los recursos alimenticios proporcionados por las macrófitas acuáticas y la vegetación riparia, son factores clave para la alta abundancia de la especie H. marginatus.