Estudiamos la biología reproductiva de Otocinclus vittatus en el sur del Pantanal, Brasil. Se analizaron 1066 peces (490 machos, 488 hembras y 88 individuos de sexo indeterminado), muestreados con un tamiz rectangular y una red de cerco entre febrero de 2009 y enero de 2011. Se estimaron variaciones en la proporción sexual, la estacionalidad de la reproducción, la fecundidad y la talla de primera madurez. No se detectaron variaciones en la proporción sexual total durante el período de estudio en su conjunto; aunque la proporción ha variado a lo largo del tiempo. El índice gonadosomático varió según el nivel del río, pero no según la temperatura del agua ni las precipitaciones. La fecundidad media se estimó en 84,1 ovocitos, con una correlación positiva con la longitud estándar. La talla de primera madurez (L50) estimada fue de 18,7 mm para las hembras y de 20,1 mm para los machos.