Bacillus thuringiensis es una bacteria utilizada en la producción de biopesticidas y en plantas resistentes a plagas gracias a la síntesis de cristales proteicos por genes cry, eficaces para controlar diversos órdenes de insectos, como los lepidópteros. Este trabajo tuvo como objetivo la evaluación y caracterización de dos nuevos aislados de B. thuringiensis activos contra larvas de A. gemmatalis (Hübner 1818), la principal plaga de la soja. Los resultados mostraron que el aislado Bt117-4 amplificó fragmentos correspondientes a los genes cry2 y cry9, y sintetizó fragmentos proteicos equivalentes a 130, 90 y 45 kDa. El aislado Bt3146-4 amplificó fragmentos de ADN correspondientes al gen cry9 y sintetizó fragmentos proteicos de 70, 58 y 38 kDa. La microscopía electrónica de transmisión reveló la presencia de cristales proteicos en ambos aislados. CL50 con proteínas purificadas con Cry de Bt117-4 y Bt3146-4, correspondió a 0,195 y 0,191 µg de larva-1, respectivamente. Los dos aislados de B. thuringiensis seleccionados en este estudio fueron eficaces para controlar la oruga del frijol terciopelo en condiciones de laboratorio. Se deben realizar pruebas de campo para desarrollar nuevas formulaciones de biopesticidas, así como para el recurso genético Cry para plantas transgénicas resistentes a Anticarsia gemmatalis.