En la investigación oftálmica, hay una fuerte necesidad de modelos de células corneales in vitro. Aquí, describimos diferentes protocolos para el cultivo de células corneales primarias que fueron aisladas de ojos de cerdo. Esta cultura celular primaria se puede utilizar para probar nuevas opciones terapéuticas para enfermedades corneales, como la enfermedad del ojo seco, lesiones traumáticas o infecciones corneales, y para estudiar la expansión de células madre epiteliales limbares (LESC). Se realizaron dos métodos de aislamiento diferentes: el método de crecimiento y el método de colagenasa. Para llevar a cabo el protocolo de crecimiento, se generaron pequeños explantes del limbo corneal y se incubaron en frascos de cultivo en un incubador durante 4-5 semanas. En cuanto al método de colagenasa, para extraer células corneales, se retiraron las córneas porcinas, se cortaron en trozos pequeños y se incubaron con colagenasa. Después de la incubación y centrifugación, las células se sembraron en placas de 6 o 12 pocillos y se incubaron en un incubador durante 2-3 semanas. También se discuten las diferencias entre el cultivo de células corneales con suero fetal bovino (FBS) y sin él. Por lo tanto, las principales ventajas del método de crecimiento son que requiere menos ojos de cerdo y tarda menos tiempo en realizarse en comparación con el método de colagenasa. Por otro lado, con el método de colagenasa, se obtienen células maduras antes, aproximadamente a las 2 o 3 semanas.