La diapausa es una forma de dormancia que los organismos utilizan para adaptarse a entornos extremos al exhibir un arresto en el desarrollo. En el gusano de seda, se piensa que la diapausa es inducida por la señalización de la hormona de diapausa (DH), que consiste en interacciones entre la DH y el receptor de DH (DHR). Sin embargo, los pasos posteriores de la vía de señalización de DH son en gran medida desconocidos. En el presente estudio, inyectamos directamente DH sintetizada en las pupas hembras de una cepa multivoltina y no diapausante a las 36 horas después de la pupación. Encontramos que el nivel de ARNm disminuyó a las 4 horas y se recuperó a las 12 horas después de la inyección de DH. Así, secuenciamos el transcriptoma de los ovarios a las 4 horas y 12 horas después de la inyección de DH. Identificamos 60 y 221 genes expresados diferencialmente a las 4 horas y 12 horas después de la inyección, respectivamente. Todos los DEGs fueron identificados, relacionados con genes relacionados con 20E, genes relacionados con JH, desintoxicación celular, proteínas ribosomales, metabolismo de lípidos y modificaciones epigenéticas. Se seleccionaron once genes de las categorías anteriores para verificar los datos del transcriptoma. Los patrones de expresión de qRT-PCR y RNA-Seq de los genes fueron consistentes, lo que indicó la autenticidad y fiabilidad de los datos del transcriptoma. Este estudio amplía drásticamente nuestro conocimiento sobre la variación en la expresión génica en la fase temprana de liberación de DH.