Utilizando diclorometano como un sustituto extremadamente eficiente para fenol/cloroformo en la extracción de ARN con pureza excepcional de tejidos leñosos de coco
Autores: Iqbal, Amjad; Yang, Yaodong
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Utilizando diclorometano como un sustituto extremadamente eficiente para fenol/cloroformo en la extracción de ARN con pureza excepcional de tejidos leñosos de coco
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
ARN de alta calidad
Tejidos maduros de coco
Método novedoso
Diclorometano
Aislamiento de ARN
Producción de cDNA
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 24
Citaciones: Sin citaciones
La obtención de ARN de alta calidad a partir de tejidos de coco maduro es un proceso complicado y laborioso debido a la intrincada estructura de polisacáridos, polifenoles, lípidos y proteínas que forman complejos firmes con los ácidos nucleicos. Sin embargo, hemos desarrollado de manera efectiva un método novedoso por primera vez, permitiendo que la extracción de ARN de alta calidad de las raíces, endospermo y mesocarpio de los árboles de coco maduro tenga lugar. En este método, explotamos el diclorometano como reemplazo del fenol/cloroformo para la recuperación de ARN de tejidos de coco maduro. La cantidad de ARN de alta calidad adquirida de las raíces de los árboles de coco maduro fue de 120.7 ug/g, con una relación A260/280 de 1.95. De manera similar, el mesocarpio de coco maduro produjo 134.6 ug/g de ARN de calidad con una relación A260/280 de 1.98, mientras que el endospermo de coco maduro produjo 120.4 ug/g de ARN de calidad con una relación A260/280 de 2.01. Además, el aislamiento de ARN utilizando el método de diclorometano mostró un excelente rendimiento en experimentos posteriores, especialmente en la RT-PCR para la producción y amplificación de cDNA. Por el contrario, los kits de plantas de ARN, TRIZOL y los métodos de Bromuro de Amonio Cuaternario de Trimetilo (CTAB) no tuvieron éxito en aislar cantidades sustanciales de ARN con purezas excepcionales de los tejidos de coco mencionados. A la luz de estos hallazgos, concluimos que el método recién desarrollado será fundamental para extraer de manera efectiva ARN con alta pureza de los tejidos de coco maduro.
Descripción
La obtención de ARN de alta calidad a partir de tejidos de coco maduro es un proceso complicado y laborioso debido a la intrincada estructura de polisacáridos, polifenoles, lípidos y proteínas que forman complejos firmes con los ácidos nucleicos. Sin embargo, hemos desarrollado de manera efectiva un método novedoso por primera vez, permitiendo que la extracción de ARN de alta calidad de las raíces, endospermo y mesocarpio de los árboles de coco maduro tenga lugar. En este método, explotamos el diclorometano como reemplazo del fenol/cloroformo para la recuperación de ARN de tejidos de coco maduro. La cantidad de ARN de alta calidad adquirida de las raíces de los árboles de coco maduro fue de 120.7 ug/g, con una relación A260/280 de 1.95. De manera similar, el mesocarpio de coco maduro produjo 134.6 ug/g de ARN de calidad con una relación A260/280 de 1.98, mientras que el endospermo de coco maduro produjo 120.4 ug/g de ARN de calidad con una relación A260/280 de 2.01. Además, el aislamiento de ARN utilizando el método de diclorometano mostró un excelente rendimiento en experimentos posteriores, especialmente en la RT-PCR para la producción y amplificación de cDNA. Por el contrario, los kits de plantas de ARN, TRIZOL y los métodos de Bromuro de Amonio Cuaternario de Trimetilo (CTAB) no tuvieron éxito en aislar cantidades sustanciales de ARN con purezas excepcionales de los tejidos de coco mencionados. A la luz de estos hallazgos, concluimos que el método recién desarrollado será fundamental para extraer de manera efectiva ARN con alta pureza de los tejidos de coco maduro.