El objetivo de este estudio fue evaluar la biodecoloración y detoxificación del fármaco anticancerígeno mitoxantrona (MTX) mediante peroxidasa cruda versátil inmovilizada de CCBAS 930 (icVP/Ba). La peroxidasa cruda concentrada se obtuvo de un cultivo de CCBAS 930 en medio con adición de MTX (ug/mL), inmovilizada con un 4% de alginato de sodio. Se determinó el grado de eliminación de MTX (decoloración), los niveles de compuestos fenólicos y radicales libres durante la biotransformación de MTX. Además, se evaluaron la fitotoxicidad (L.), biotoxicidad (ensayo microbiano de múltiples especies, MARA) y genotoxicidad (SOS Chromotest) de MTX antes y después del tratamiento biológico. El uso de icVP/Ba (95 U/mL) acortó significativamente la bioremoción de 10 ug/mL de MTX (95.57% después de 72 h). La eliminación de MTX por icVP/Ba se correlacionó con una disminución del 85% y 90% en los niveles de compuestos fenólicos y radicales libres, respectivamente. Además, el uso de icVP/Ba contribuyó a una disminución en la fitotoxicidad, biotoxicidad y genotoxicidad de MTX. Este es el primer estudio que describe la posibilidad de eliminar MTX utilizando peroxidasa fúngica cruda inmovilizada.