Concentración y cuantificación de ARN de SARS-CoV-2 en aguas residuales utilizando concentración basada en polietilenglicol y qRT-PCR
Autores: Farkas, Kata; Hillary, Luke S.; Thorpe, Jamie; Walker, David I.; Lowther, James A.; McDonald, James E.; Malham, Shelagh K.; Jones, Davey L.
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Concentración y cuantificación de ARN de SARS-CoV-2 en aguas residuales utilizando concentración basada en polietilenglicol y qRT-PCR
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Aguas residuales
Epidemiología
Brotes de SARS-CoV-2
Polietilenglicol
Extracción de ARN
QRT-PCR
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 46
Citaciones: Sin citaciones
La epidemiología basada en aguas residuales se ha convertido en una herramienta importante para la vigilancia de brotes de SARS-CoV-2. Sin embargo, la detección de virus en aguas residuales es un desafío y hasta la fecha no existe un método estándar disponible que haya sido validado para la detección sensible de SARS-CoV-2. En este documento, describimos un método de concentración simple basado en precipitación de polietilenglicol (PEG), seguido de extracción de ARN y una PCR cuantitativa de transcripción inversa en una sola etapa (qRT-PCR) para la detección viral en aguas residuales. La concentración basada en PEG de virus es un procedimiento simple que no está limitado por la disponibilidad de equipos costosos y tiene un riesgo reducido de interrupción en las cadenas de suministro de consumibles. Los pasos de concentración y extracción de ARN permiten una concentración de 900-1500 veces de muestras de aguas residuales y eliminan suficientemente la mayoría de la materia orgánica, que podría inhibir el ensayo qRT-PCR posterior. Debido a la alta variación en las propiedades fisicoquímicas de las muestras de aguas residuales, recomendamos el uso de virus de control de proceso para determinar la eficacia de cada paso. Este procedimiento permite la concentración y la extracción del ADN/ARN de diferentes virus y, por lo tanto, puede utilizarse para la vigilancia de diferentes objetivos virales para la evaluación integral de enfermedades virales en una comunidad.
Descripción
La epidemiología basada en aguas residuales se ha convertido en una herramienta importante para la vigilancia de brotes de SARS-CoV-2. Sin embargo, la detección de virus en aguas residuales es un desafío y hasta la fecha no existe un método estándar disponible que haya sido validado para la detección sensible de SARS-CoV-2. En este documento, describimos un método de concentración simple basado en precipitación de polietilenglicol (PEG), seguido de extracción de ARN y una PCR cuantitativa de transcripción inversa en una sola etapa (qRT-PCR) para la detección viral en aguas residuales. La concentración basada en PEG de virus es un procedimiento simple que no está limitado por la disponibilidad de equipos costosos y tiene un riesgo reducido de interrupción en las cadenas de suministro de consumibles. Los pasos de concentración y extracción de ARN permiten una concentración de 900-1500 veces de muestras de aguas residuales y eliminan suficientemente la mayoría de la materia orgánica, que podría inhibir el ensayo qRT-PCR posterior. Debido a la alta variación en las propiedades fisicoquímicas de las muestras de aguas residuales, recomendamos el uso de virus de control de proceso para determinar la eficacia de cada paso. Este procedimiento permite la concentración y la extracción del ADN/ARN de diferentes virus y, por lo tanto, puede utilizarse para la vigilancia de diferentes objetivos virales para la evaluación integral de enfermedades virales en una comunidad.