Antecedentes y objetivos: La leishmaniasis felina (FeL) es causada por varias especies de parásitos del género. La enfermedad puede presentarse con la presencia o ausencia de signos clínicos, similares a los observados en otras enfermedades infecciosas comunes. En regiones endémicas de FeL, la infección se ha asociado con lesiones dermatológicas. Por lo tanto, considerando la búsqueda de técnicas de diagnóstico menos invasivas y más efectivas, nuestro objetivo fue investigar la presencia de spp. en gatos domésticos a través de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y análisis de fusión de alta resolución (HRM) de células epiteliales conjuntivales, orales y nasales, y detectamos la presencia de anticuerpos anti-IgG mediante técnicas serológicas de la Prueba de Anticuerpos por Inmunofluorescencia (IFAT) y ELISA. Métodos: La PCR y HRM para la detección de spp. se realizaron en 36 muestras de células epiteliales de la conjuntiva de gatos machos y hembras, recolectadas utilizando hisopos estériles. También se realizaron las pruebas serológicas IFAT y ELISA. Resultados: La prevalencia de infección fue del 11.1% (4/36) por el ensayo de PCR, y esos resultados fueron confirmados para especies utilizando la técnica de HRM. Veinticuatro gatos (24/36 = 66.7%) fueron reactivos a la IFAT y veintidós gatos fueron reactivos por la técnica de ELISA (22/36 = 61.1%). Interpretación y conclusiones: El uso de hisopos conjuntivales demostró ser una técnica no invasiva, práctica y fácil de realizar, y además de la secuenciación genética y HRM, pudo identificar el ADN parasitario de en gatos. Esta técnica puede ser utilizada para el diagnóstico de detección en futuras encuestas epidemiológicas de FeL y puede ser utilizada como complemento a pruebas clínicas y/o serológicas, así como asociando la historia clínica del animal, para la conclusión diagnóstica.