La leptospirosis es una zoonosis de gran importancia para Una Salud. En este contexto, el bioma amazónico puede albergar numerosos hospedadores de spp. que contribuyen al mantenimiento del patógeno en el medio ambiente. Algunos reptiles, como los quelonios, han sido poco estudiados en términos de su implicación con leptospiras. El objetivo de este estudio fue detectar ADN de spp. en tortugas mantenidas en cautiverio en una región de la Amazonía brasileña. Se recolectaron un total de 147 muestras de sangre ( = 40), líquido cloacal ( = 27), lavado cloacal ( = 40) y estómago ( = 40) de 40 quelonios. Después de la extracción de ADN, las muestras se sometieron a amplificación de un producto de 331 pares de bases del gen 16S rRNA utilizando los primers Lep1 y Lep2. Los productos de PCR fueron secuenciados por Sanger, ensamblados y sometidos a búsqueda en línea y análisis filogenético. De los animales analizados, el 40% (16/40, intervalo de confianza [IC] del 95%: 25-55) tuvo al menos una o dos muestras positivas para spp. Considerando el número total de muestras recolectadas, el 12.93% (19/147) fueron positivas, siendo los coágulos de sangre (27.5%; 11/40), seguidos por los lavados cloacales (10%; 4/40), líquido cloacal (11.11%; 3/27) y lavados gástricos (2.5%; 1/40). De estas, 11 muestras fueron secuenciadas y mostraron una identidad del 99% al 100% con secuencias, lo que fue confirmado por análisis filogenético. Este es el primer estudio en detectar ADN patógeno en quelonios en una región de la Amazonía brasileña. Se ha concluido que las tortugas en cautiverio han estado expuestas a patógenos.