La detección del antígeno circulante glutatión S-transferasa en ovejas infectadas con un ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas con amplificación de señal de sándwich de doble anticuerpo
Autores: Duan, Jiahui; Zhang, Nan; Liu, Shaoxiong; Li, Jianhua; Gong, Pengtao; Wang, Xiaocen; Li, Xin; Zhang, Xu; Tang, Bo; Zhang, Xichen
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2024
Acceso abierto
Artículo científico
2024
La detección del antígeno circulante glutatión S-transferasa en ovejas infectadas con un ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas con amplificación de señal de sándwich de doble anticuerpo
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Enfermedad parasitaria
Streptavidina-ELISA
Antígeno de detección
Antígenos circulantes
Genes de antígenos inmunodominantes
Detección serológica
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 8
Citaciones: Sin citaciones
La fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonótica global causada por una infección que es particularmente perjudicial para el ganado y las ovejas. Un ELISA de amplificación de señal de biotina-estreptavidina (streptavidin-ELISA/SA-ELISA) basado en antígenos circulantes puede permitir la detección temprana de animales infectados y es adecuado para la detección por lotes. Se considera un mejor medio para detectar la infección que los métodos de detección tradicionales. En este estudio, utilizando el suero de ovejas infectadas artificialmente, se cribó la biblioteca de expresión de cDNA, se obtuvieron 17 genes de antígenos inmunodominantes y se seleccionó la glutatión S-transferasa (GST) como el antígeno candidato para la detección. En primer lugar, se amplificó la secuencia de cDNA de GST, seguida de la preparación de la proteína recombinante GST (rFhGST). Luego, se prepararon anticuerpos monoclonales y policlonales contra rFhGST utilizando la proteína GST. Posteriormente, se observó la inmunolocalización de la proteína objetivo en el gusano mediante microscopía confocal, y se encontró que la proteína GST estaba localizada en el útero, el tracto intestinal y la superficie corporal. Finalmente, se estableció un SA-ELISA de sándwich de doble anticuerpo basado en la detección de antígenos circulantes. No hubo reacción cruzada con sueros positivos infectados. Se analizaron 40 muestras de suero y heces del mismo lote de ovejas en el condado de Nong"an, ciudad de Changchun, provincia de Jilin, China, utilizando el método de detección establecido y el método de detección de heces. La tasa de positividad del SA-ELISA fue del 17.5%, y la tasa de positividad del método de detección de heces fue del 15%. Los resultados de detección de este método fueron 100% consistentes con los kits comerciales de ELISA. Se probaron un total de 152 muestras de suero de ovejas en el condado de Nong"an, ciudad de Changchun, provincia de Jilin, y la tasa de positividad fue del 5.92%. Este estudio sentó las bases para el desarrollo de preparaciones de detección serológica de infecciones basadas en la detección de antígenos circulantes.
Descripción
La fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonótica global causada por una infección que es particularmente perjudicial para el ganado y las ovejas. Un ELISA de amplificación de señal de biotina-estreptavidina (streptavidin-ELISA/SA-ELISA) basado en antígenos circulantes puede permitir la detección temprana de animales infectados y es adecuado para la detección por lotes. Se considera un mejor medio para detectar la infección que los métodos de detección tradicionales. En este estudio, utilizando el suero de ovejas infectadas artificialmente, se cribó la biblioteca de expresión de cDNA, se obtuvieron 17 genes de antígenos inmunodominantes y se seleccionó la glutatión S-transferasa (GST) como el antígeno candidato para la detección. En primer lugar, se amplificó la secuencia de cDNA de GST, seguida de la preparación de la proteína recombinante GST (rFhGST). Luego, se prepararon anticuerpos monoclonales y policlonales contra rFhGST utilizando la proteína GST. Posteriormente, se observó la inmunolocalización de la proteína objetivo en el gusano mediante microscopía confocal, y se encontró que la proteína GST estaba localizada en el útero, el tracto intestinal y la superficie corporal. Finalmente, se estableció un SA-ELISA de sándwich de doble anticuerpo basado en la detección de antígenos circulantes. No hubo reacción cruzada con sueros positivos infectados. Se analizaron 40 muestras de suero y heces del mismo lote de ovejas en el condado de Nong"an, ciudad de Changchun, provincia de Jilin, China, utilizando el método de detección establecido y el método de detección de heces. La tasa de positividad del SA-ELISA fue del 17.5%, y la tasa de positividad del método de detección de heces fue del 15%. Los resultados de detección de este método fueron 100% consistentes con los kits comerciales de ELISA. Se probaron un total de 152 muestras de suero de ovejas en el condado de Nong"an, ciudad de Changchun, provincia de Jilin, y la tasa de positividad fue del 5.92%. Este estudio sentó las bases para el desarrollo de preparaciones de detección serológica de infecciones basadas en la detección de antígenos circulantes.