La leptospirosis es una enfermedad zoonótica bacteriana desatendida de distribución mundial que está presente en diferentes especies animales. Este estudio epidemiológico determinó la seroprevalencia de spp. patógenos en animales en un centro de rehabilitación de vida silvestre en Puerto Montt, sur de Chile, mediante el muestreo de 60 animales pertenecientes a tres clases (aves, mamíferos y reptiles). El diagnóstico se realizó utilizando la prueba de aglutinación microscópica con un panel de ocho serovariedades y serogrupos. Los resultados mostraron que 15 animales tenían anticuerpos anti-, obteniendo una seroprevalencia del 25.00%, con el serogrupo Tarassovi presentando reactividad en 13 de los animales seropositivos. Entre las clases de mamíferos, los zorros chilla y los pudús fueron seropositivos. Una guiña también fue seropositiva, lo que se describió por primera vez en mamíferos. Entre las clases de aves, los loros choroy, las bandurrias y los pingüinos de Magallanes fueron seropositivos. Se necesitan exámenes de rutina para diagnosticar leptospirosis, realizar vigilancia epidemiológica y aplicar medidas de prevención y control, y se recomienda realizar investigaciones adicionales centradas en el enfoque de Una Salud para explorar el papel epidemiológico de diferentes especies de animales silvestres en el mantenimiento y transmisión de la leptospirosis a nivel local y global.