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Detección Basada en RPA-CRISPR/Cas12a de

Autores: Zhang, Kunli; Sun, Zeyi; Shi, Keda; Yang, Dongxia; Bian, Zhibiao; Li, Yan; Gou, Hongchao; Jiang, Zhiyong; Yang, Nanling; Chu, Pinpin; Zhai, Shaolun; Wei, Zhanyong; Li, Chunling

Idioma: Inglés

Editor: MDPI

Año: 2023

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Acceso abierto

Artículo científico
2023

Detección Basada en RPA-CRISPR/Cas12a de


Categoría

Ciencias Agrícolas y Biológicas

Subcategoría

Zootecnia

Palabras clave

Bacteria patógena
Producción porcina
Diagnóstico rápido
Amplificación por polimerasa recombinante
Tecnología CRISPR
Extracción de ácidos nucleicos

Licencia

CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual

Consultas: 21

Citaciones: Sin citaciones


Descripción
(HPS) es una bacteria patógena prominente en la producción porcina. Su infección conduce a una inflamación fibrinosa generalizada en varios tejidos y órganos de los cerdos, a menudo en conjunto con diversas infecciones virales respiratorias, y provoca pérdidas económicas sustanciales en la industria porcina. Por lo tanto, el diagnóstico rápido de este patógeno es de suma importancia. En este estudio, utilizamos la amplificación de polimerasa por recombinasa (RPA) y la tecnología de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR) para establecer un sistema de detección y análisis conveniente que sea rápido de detectar, fácil de implementar y preciso para analizar, conocido como análisis RPA-CRISPR/Cas12a. El proceso desde la muestra hasta los resultados se puede completar en 1 hora con alta sensibilidad (0.163 pg/L de plantilla de ADN, < 0.05), lo que es 10 veces más alto que el método PCR común. Los resultados de la prueba de especificidad muestran que el análisis RPA-CRISPR/Cas12a no reaccionó con otros patógenos porcinos comunes, incluidos los tipos II y IX, (< 0.0001). El ensayo RPA-CRISPR/Cas12a se aplicó a 15 serotipos de muestras clínicas a través de la extracción cruda de ácidos nucleicos mediante el método de ebullición, y todas las muestras fueron identificadas con éxito. Reduce en gran medida el tiempo y el costo de extracción de ácidos nucleicos. Además, el método permite visualizar los resultados con luz azul. El método de detección preciso y conveniente podría incorporarse en un formato portátil como diagnóstico en el punto de atención (POC) para el nivel de campo.

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