Detección Basada en RPA-CRISPR/Cas12a de
Autores: Zhang, Kunli; Sun, Zeyi; Shi, Keda; Yang, Dongxia; Bian, Zhibiao; Li, Yan; Gou, Hongchao; Jiang, Zhiyong; Yang, Nanling; Chu, Pinpin; Zhai, Shaolun; Wei, Zhanyong; Li, Chunling
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Detección Basada en RPA-CRISPR/Cas12a de
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Bacteria patógena
Producción porcina
Diagnóstico rápido
Amplificación por polimerasa recombinante
Tecnología CRISPR
Extracción de ácidos nucleicos
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 21
Citaciones: Sin citaciones
(HPS) es una bacteria patógena prominente en la producción porcina. Su infección conduce a una inflamación fibrinosa generalizada en varios tejidos y órganos de los cerdos, a menudo en conjunto con diversas infecciones virales respiratorias, y provoca pérdidas económicas sustanciales en la industria porcina. Por lo tanto, el diagnóstico rápido de este patógeno es de suma importancia. En este estudio, utilizamos la amplificación de polimerasa por recombinasa (RPA) y la tecnología de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR) para establecer un sistema de detección y análisis conveniente que sea rápido de detectar, fácil de implementar y preciso para analizar, conocido como análisis RPA-CRISPR/Cas12a. El proceso desde la muestra hasta los resultados se puede completar en 1 hora con alta sensibilidad (0.163 pg/L de plantilla de ADN, < 0.05), lo que es 10 veces más alto que el método PCR común. Los resultados de la prueba de especificidad muestran que el análisis RPA-CRISPR/Cas12a no reaccionó con otros patógenos porcinos comunes, incluidos los tipos II y IX, (< 0.0001). El ensayo RPA-CRISPR/Cas12a se aplicó a 15 serotipos de muestras clínicas a través de la extracción cruda de ácidos nucleicos mediante el método de ebullición, y todas las muestras fueron identificadas con éxito. Reduce en gran medida el tiempo y el costo de extracción de ácidos nucleicos. Además, el método permite visualizar los resultados con luz azul. El método de detección preciso y conveniente podría incorporarse en un formato portátil como diagnóstico en el punto de atención (POC) para el nivel de campo.
Descripción
(HPS) es una bacteria patógena prominente en la producción porcina. Su infección conduce a una inflamación fibrinosa generalizada en varios tejidos y órganos de los cerdos, a menudo en conjunto con diversas infecciones virales respiratorias, y provoca pérdidas económicas sustanciales en la industria porcina. Por lo tanto, el diagnóstico rápido de este patógeno es de suma importancia. En este estudio, utilizamos la amplificación de polimerasa por recombinasa (RPA) y la tecnología de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR) para establecer un sistema de detección y análisis conveniente que sea rápido de detectar, fácil de implementar y preciso para analizar, conocido como análisis RPA-CRISPR/Cas12a. El proceso desde la muestra hasta los resultados se puede completar en 1 hora con alta sensibilidad (0.163 pg/L de plantilla de ADN, < 0.05), lo que es 10 veces más alto que el método PCR común. Los resultados de la prueba de especificidad muestran que el análisis RPA-CRISPR/Cas12a no reaccionó con otros patógenos porcinos comunes, incluidos los tipos II y IX, (< 0.0001). El ensayo RPA-CRISPR/Cas12a se aplicó a 15 serotipos de muestras clínicas a través de la extracción cruda de ácidos nucleicos mediante el método de ebullición, y todas las muestras fueron identificadas con éxito. Reduce en gran medida el tiempo y el costo de extracción de ácidos nucleicos. Además, el método permite visualizar los resultados con luz azul. El método de detección preciso y conveniente podría incorporarse en un formato portátil como diagnóstico en el punto de atención (POC) para el nivel de campo.