El kaempferol y la quercetina son metabolitos secundarios esenciales de las plantas que confieren enormes funciones biológicas en el sistema de defensa de las plantas. En este estudio, se construyeron vías biosintéticas para el kaempferol y la quercetina utilizando naringenina como sustrato. Se clonó en el vector de plásmido episomal de levadura pRS42K (YEp) y se analizó la actividad del gen objetivo en cepas modificadas y vacías. Confirmamos un nuevo paso de la biosíntesis de kaempferol y quercetina directamente a partir de naringenina, catalizado por la flavanona 3-hidroxilasa de arroz. Los resultados se confirmaron mediante cromatografía en capa fina (TLC) seguida de western blotting, resonancia magnética nuclear (RMN) y cromatografía líquida-espectrometría de masas (LCMS-MS). La TLC mostró resultados positivos al comparar ambos compuestos extraídos de la cepa modificada con el estándar de referencia. El western blotting confirmó la falta de actividad en cepas vacías y confirmó una alta expresión en cepas modificadas. La espectroscopía de RMN confirmó solo la quercetina, mientras que los resultados de LCMS-MS revelaron que es responsable de la conversión de naringenina tanto a kaempferol como a quercetina.