Contexto: La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un método de alta sensibilidad y pre-cisión para el análisis de muestras de apitoxina. Sin embargo, tiene la desventaja de generar altos costos financieros, ambientales y de tiempo. Objetivos: El objetivo de este estudio es desarrollar un método de HPLC más corto para la cuantificación de muestras de apitoxina. Métodos: El método se realizó y validó en una columna RP-C18, fases móviles A (agua y ácido trifluoroacético (TFA) 0,1%) y B (acetoni-trilo y TFA 0,1%), modo gradiente, velocidad de flujo 1,5 mL/min y absorbancia A 220 nm. Resultados clave: La elución en gradiente 5% - 70% de la fase B durante 20 minutos, después de una elución isocrá-tica de 4 minutos con 5% de B a 25 °C. Los resultados mostraron una linealidad en el rango entre 0,084 y 0,84 mg/mL (R2=0,995) para melitina y entre 0,02 y 0,20 mg/mL (R2=0,995) para apamina, método pre-ciso (tasa de recuperación 101,11 ± 9,47 % y 113,57 ± 15,06 % respectivamente). Precisión: 10,37 y 9,33 para melitina y apamina respectivamente, y resultado de un método selectivo en su matriz habitual. El LOD fue 0,00178 y 0,00117 mg/mL, mientras que el LOQ fue 0,00541 y 0,00353 mg/mL, para melitina y apamina, respectivamente.