(Kp) es una bacteria Gram-negativa y una de las principales causas de sepsis neonatal en países de ingresos bajos y medios, a menudo asociada con resistencia a los antimicrobianos. Se expresan dos tipos de polisacáridos en la superficie celular de Kp y se han propuesto como antígenos clave para el diseño de vacunas: polisacáridos capsulares (conocidos como antígenos K, K-Ags) y antígenos O (O-Ags). Históricamente, Kp ha sido clasificada utilizando serotipificación de cápsulas y, aunque hasta ahora se han predicho 186 genotipos distintos basados en análisis de secuencias, muchas estructuras aún son desconocidas. En contraste, solo se han descrito 11 serotipos OAg distintos. La caracterización de cepas emergentes requiere el desarrollo de un método de purificación de alto rendimiento para obtener suficiente material de K- y O-Ag para caracterizar la gran colección de serotipos y obtener información sobre características estructurales y potencial reactividad cruzada que podría permitir la simplificación de la vacuna. Aquí, esto se logró adaptando nuestro método establecido para la purificación simple de O-Ags, utilizando hidrólisis ácida suave realizada directamente en células bacterianas, seguida de pasos de filtración y precipitación. El método se aplicó con éxito para purificar los carbohidratos de superficie de diferentes cepas de Kp, demostrando así la robustez y aplicabilidad general del método de purificación desarrollado. Además, la caracterización de antígenos mostró que el método de purificación no tuvo impacto en la integridad estructural de los polisacáridos y preservó sustituyentes lábiles como grupos O-acetilo y piruvilo. Este método puede ser optimizado aún más para escalar y fabricar para apoyar el desarrollo de vacunas basadas en sacáridos de alta valencia contra Kp.