Las subunidades de glutenina de alto peso molecular (HMW-GSs) codificadas por alelos en los loci , , y confieren propiedades únicas de calidad de uso final al trigo común ( L.). Las accesiones de trigo con la combinación de alta calidad de HMW-GSs Ax2*/Bx7/Dx5 generalmente muestran características de gluten fuertes. Con el fin de apilar estos tres genes de subunidades de alta calidad mediante marcadores moleculares en la cría de trigo con gluten fuerte, se desarrolló un marcador de PCR multiplex basado en gel de agarosa para estos HMW-GSs de alta calidad y dos marcadores de PCR multiplex basados en gel de agarosa que detectan la homocigosis de las subunidades Ax2* y Bx7. Estos marcadores fueron verificados en una población segregante F de un cruce entre un cultivar de trigo de invierno de gluten medio con la combinación de HMW-GSs de Ax nulo/Bx7 + By8/Dx4 + Dy12 y un cultivar de trigo de primavera de gluten fuerte con la combinación de HMW-GSs de Ax2*/Bx7 + By8*/Dx5 + Dy10. Al integrar los nuevos marcadores de PCR multiplex establecidos y un marcador de PCR codominante publicado de la subunidad Dx5, se estableció un sistema completo de selección de marcadores moleculares. Después de múltiples rondas de selección asistida por marcadores moleculares con el sistema, se generaron 17 líneas de trigo de invierno homocigotas que apilaban los tres HMW-GSs de alta calidad. La fuerza del gluten de estas líneas homocigotas era comparable a la de su progenitor de gluten fuerte, pero significativamente mayor que la de su progenitor de gluten medio al medir sus capacidades de retención de solvente de ácido láctico-dodecil sulfato de harina de trigo integral. Los sistemas de PCR multiplex establecidos en el presente estudio pueden ser utilizados para la selección asistida por marcadores moleculares de trigos con gluten fuerte.