Establecimiento de un método ELISA para la detección cuantitativa de PAT/pat en cultivos transgénicos
Autores: Liu, Weixiao; Meng, Lixia; Liu, Xuri; Liu, Chao; Jin, Wujun
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2022
Acceso abierto
Artículo científico
2022
Establecimiento de un método ELISA para la detección cuantitativa de PAT/pat en cultivos transgénicos
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas Generales
Palabras clave
Phosphinothricin
Gen de N-acetiltransferasa
Cultivos transgénicos
Ensayo de inmunoadsorción enzimática
Anticuerpos monoclonales
Método ELISA
Licencia
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Consultas: 21
Citaciones: Sin citaciones
El gen de la fosfinothricina N-acetiltransferasa se utiliza ampliamente para conferir resistencia al herbicida fosfinothricina en cultivos modificados genéticamente (GM). Se desarrolló un ensayo inmunoenzimático cuantitativo de sándwich enzimático (ELISA) para detectar PAT/pat en cultivos GM. Dos anticuerpos monoclonales anti-PAT/pat (mAbs), 1F5-1F2 y 1B6-2D3, con títulos de 1:1,024,000 y 1:896,000, respectivamente, contra His-PAT/pat sobreexpresado, fueron seleccionados, producidos y caracterizados. Se estableció un método ELISA con el mAb 1F5-2F2 para la captura y el mAb 1B6-2D3 marcado con biotina para la detección de PAT/pat. El rango de detección lineal del método fue aproximadamente de 1.5625 a 12.5 ng/mL, con una sensibilidad de 0.085 ng/mL y un coeficiente de variación (CV) inferior al 5.0%. No se encontró reactividad cruzada con otras proteínas de resistencia a herbicidas, especialmente PAT/bar. El ELISA sensible y específico establecido se aplicó con éxito en la detección de la expresión de PAT/pat en cultivos GM.
Descripción
El gen de la fosfinothricina N-acetiltransferasa se utiliza ampliamente para conferir resistencia al herbicida fosfinothricina en cultivos modificados genéticamente (GM). Se desarrolló un ensayo inmunoenzimático cuantitativo de sándwich enzimático (ELISA) para detectar PAT/pat en cultivos GM. Dos anticuerpos monoclonales anti-PAT/pat (mAbs), 1F5-1F2 y 1B6-2D3, con títulos de 1:1,024,000 y 1:896,000, respectivamente, contra His-PAT/pat sobreexpresado, fueron seleccionados, producidos y caracterizados. Se estableció un método ELISA con el mAb 1F5-2F2 para la captura y el mAb 1B6-2D3 marcado con biotina para la detección de PAT/pat. El rango de detección lineal del método fue aproximadamente de 1.5625 a 12.5 ng/mL, con una sensibilidad de 0.085 ng/mL y un coeficiente de variación (CV) inferior al 5.0%. No se encontró reactividad cruzada con otras proteínas de resistencia a herbicidas, especialmente PAT/bar. El ELISA sensible y específico establecido se aplicó con éxito en la detección de la expresión de PAT/pat en cultivos GM.