El hongo filamentoso es ampliamente explotado por la industria de fermentación para la producción de enzimas, particularmente glucoamilasa. Aunque se han utilizado con éxito una variedad de técnicas genéticas en el tipo salvaje, la transformación de cepas utilizadas industrialmente con pocos conidios (por ejemplo, N1) o que son incluso aconidiales (por ejemplo, O1) sigue siendo laboriosa. En este trabajo, desarrollamos herramientas genéticas, incluyendo la transformación mediada por protoplastos y la transformación mediada por - de las cepas N1 y O1 utilizando proteína verde fluorescente como marcador reportero. Tras la optimización de varios factores para la liberación de protoplastos del micelio, la eficiencia de transformación mediada por protoplastos alcanzó el 89.3% (25/28) para N1 y el 82.1% (32/39) para O1. La eficiencia de transformación mediada por - fue del 98.2% (55/56) para N1 y del 43.8% (28/64) para O1. También desarrollamos un sistema de edición del genoma CRISPR/Cas9 sin marcadores utilizando un plásmido basado en AMA1 para expresar la proteína Cas9 y sgRNA. De 22 transformantes, se construyeron 9 mutantes de deleción en el fondo N1 utilizando el método de transformación mediada por protoplastos y el sistema CRISPR/Cas9 sin marcadores desarrollado aquí. Los métodos de edición del genoma mejorados aquí acelerarán la elucidación del mecanismo de hiperaproducción de glucoamilasa en estos hongos industriales y contribuirán al uso de mutaciones dirigidas eficientes en otras cepas industriales de .