El circovirus porcino tipo 3 (PCV3) es endémico en cerdos en todo el mundo y causa trastornos reproductivos, dermatitis y síndrome nefrótico, así como inflamación multiorgánica. Actualmente, hay una creciente necesidad de métodos de diagnóstico rápidos y precisos en el monitoreo de enfermedades. En este estudio, se prepararon cuatro anticuerpos monoclonales (mAbs) contra las proteínas de la cápside del PCV3 (mAbs 2F6, 2G8, 6E2 y 7E3). Se eligió el mAb 7E3, que tenía la mayor afinidad de unión por la proteína Cap, para una investigación más profunda. Se identificó un nuevo epítopo de células B DLDGAW utilizando el mAb 7E3. Se desarrolló con éxito un ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA) de bloqueo de epítopos (EB) utilizando el mAb 7E3 marcado con peroxidasa de rábano picante para detectar anticuerpos contra el PCV3 en sueros porcinos. Además, el EB-ELISA no mostró reacción específica con otros sueros de enfermedades porcinas, y el valor de corte se definió como 35%. En comparación con el ELISA comercial, el porcentaje de acuerdo fue del 95.59%. En general, hemos desarrollado un nuevo método EB-ELISA que detecta de manera precisa y conveniente el PCV3 en suero, convirtiéndolo en una herramienta valiosa para la detección clínica de la infección por PCV3.