Establecimiento y Aplicación de un ELISA Indirecto para la Detección de Anticuerpos contra Porcinos Basado en una Proteína Recombinante de GMD
Autores: Dong, Nihua; Wang, Zhaofei; Sun, Qing; Chen, Xiaojun; Zhang, Hailong; Zheng, Jiayang; Zhang, Xinya; Qiu, Yafeng; Li, Zongjie; Li, Beibei; Liu, Ke; Shao, Donghua; Wei, Jianchao; Sun, Jianhe; Ma, Zhiyong
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Establecimiento y Aplicación de un ELISA Indirecto para la Detección de Anticuerpos contra Porcinos Basado en una Proteína Recombinante de GMD
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Zootecnia
Palabras clave
Patógeno zoonótico
Ganadería
Infección humana
Kits ELISA
Antígenos protectores
GMD-ELISA
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 9
Citaciones: Sin citaciones
es un patógeno zoonótico importante de cerdos enfermos y portadores recesivos que representa una amenaza seria para la producción ganadera y la salud pública. Generalmente causa transmisión horizontal entre cerdos. La morbilidad y mortalidad de esta enfermedad son muy altas. La infección humana se produce a través del contacto directo o indirecto con cerdos enfermos. Los dos brotes a gran escala en China se debieron al brote en granjas porcinas, que se propagó a la infección humana; por lo tanto, la detección en los rebaños de cerdos es crucial. En la actualidad, los kits comerciales de ELISA tipo 2 en el mercado solo pueden detectar serotipos individuales, con altas probabilidades de reacciones de interacción y riesgos de bioseguridad al usar inactivados como antígeno. La deshidrogenasa de glicerol-3-fosfato (GAPDH), la proteína liberada por muramidasa (MRP) y la deshidrogenasa de dihidrolipoamida (DLDH) son antígenos protectores importantes de tipo 2, tipo 7 y tipo 9. Este estudio purificó la proteína GMD (epítopos dominantes de células B de los antígenos GAPDH, MRP y DLDH) y utilizó una combinación diversa de epítopos dominantes de los múltiples antígenos diferentes como antígenos recubiertos, mejorando la sensibilidad y seguridad de los experimentos de ELISA indirecto. Se desarrolló un método de ELISA indirecto (GMD-ELISA) para detectar anticuerpos. La respuesta antígeno-anticuerpo se optimizó utilizando titulación en cuadrícula. Los resultados de las pruebas utilizando ELISA para (), (), (), y () fueron todos negativos, lo que indica que este método tenía una fuerte especificidad. Los resultados seguían siendo positivos cuando la relación de dilución del suero positivo alcanzó 1:6,400, lo que indica que el método tenía alta sensibilidad. Los resultados del ensayo de reproducibilidad para ELISA indirecto mostraron que el coeficiente de variación intraensayo y el coeficiente de variación interensayo eran inferiores al 10%, lo que indica que el método tenía buena repetibilidad. Investigamos la seroprevalencia de en 167 muestras de suero recolectadas en el este de China, y el 33.5% de las muestras fueron positivas para anticuerpos contra, lo que indica que la prevalencia de es alta en las granjas porcinas del este de China. El novedoso GMD-ELISA es un método de diagnóstico conveniente, sensible y específico que proporciona apoyo técnico para el diagnóstico rápido y la investigación epidemiológica.
Descripción
es un patógeno zoonótico importante de cerdos enfermos y portadores recesivos que representa una amenaza seria para la producción ganadera y la salud pública. Generalmente causa transmisión horizontal entre cerdos. La morbilidad y mortalidad de esta enfermedad son muy altas. La infección humana se produce a través del contacto directo o indirecto con cerdos enfermos. Los dos brotes a gran escala en China se debieron al brote en granjas porcinas, que se propagó a la infección humana; por lo tanto, la detección en los rebaños de cerdos es crucial. En la actualidad, los kits comerciales de ELISA tipo 2 en el mercado solo pueden detectar serotipos individuales, con altas probabilidades de reacciones de interacción y riesgos de bioseguridad al usar inactivados como antígeno. La deshidrogenasa de glicerol-3-fosfato (GAPDH), la proteína liberada por muramidasa (MRP) y la deshidrogenasa de dihidrolipoamida (DLDH) son antígenos protectores importantes de tipo 2, tipo 7 y tipo 9. Este estudio purificó la proteína GMD (epítopos dominantes de células B de los antígenos GAPDH, MRP y DLDH) y utilizó una combinación diversa de epítopos dominantes de los múltiples antígenos diferentes como antígenos recubiertos, mejorando la sensibilidad y seguridad de los experimentos de ELISA indirecto. Se desarrolló un método de ELISA indirecto (GMD-ELISA) para detectar anticuerpos. La respuesta antígeno-anticuerpo se optimizó utilizando titulación en cuadrícula. Los resultados de las pruebas utilizando ELISA para (), (), (), y () fueron todos negativos, lo que indica que este método tenía una fuerte especificidad. Los resultados seguían siendo positivos cuando la relación de dilución del suero positivo alcanzó 1:6,400, lo que indica que el método tenía alta sensibilidad. Los resultados del ensayo de reproducibilidad para ELISA indirecto mostraron que el coeficiente de variación intraensayo y el coeficiente de variación interensayo eran inferiores al 10%, lo que indica que el método tenía buena repetibilidad. Investigamos la seroprevalencia de en 167 muestras de suero recolectadas en el este de China, y el 33.5% de las muestras fueron positivas para anticuerpos contra, lo que indica que la prevalencia de es alta en las granjas porcinas del este de China. El novedoso GMD-ELISA es un método de diagnóstico conveniente, sensible y específico que proporciona apoyo técnico para el diagnóstico rápido y la investigación epidemiológica.