Las plataformas de pruebas precisas y rápidas son esenciales para la detección temprana y mitigación de la alfa-amilasa de madurez tardía (LMA) y la germinación previa a la cosecha (PHS) en el trigo. Estas condiciones se caracterizan por niveles elevados de alfa-amilasa y afectan negativamente la calidad de la harina, lo que resulta en pérdidas económicas sustanciales. El método del Número de Caída de Hagberg-Perten (FN) es el estándar de la industria para medir la actividad de la alfa-amilasa en la harina de trigo. Sin embargo, el FN no detecta directamente la alfa-amilasa y tiene importantes limitaciones. El desarrollo de inmunoensayos de alfa-amilasa podría permitir una detección temprana y precisa, independientemente del entorno de prueba. Con este objetivo, evaluamos la expresión de isoformas de alfa-amilasa durante el desarrollo de las semillas. Se detectaron transcritos de tres de las cuatro isoformas en granos en desarrollo y maduros. Estas fueron clonadas y utilizadas para desarrollar líneas de expresión que expresan isoformas individuales. Después de evaluar la conservación de aminoácidos entre isoformas, identificamos secuencias peptídicas específicas de una sola isoforma (TaAMY1) o que eran conservadas en todas las isoformas, para desarrollar anticuerpos monoclonales con especificidades dirigidas. Se desarrollaron tres anticuerpos monoclonales, anti-TaAMY1-A, anti-TaAMY1-B y anti-TaAMY1-C. Los tres detectaron alfa-amilasa(s) endógena(s). El anti-TaAMY1-A fue específico para TaAMY1, mientras que el anti-TaAMY1-C detectó TaAMY1, 2 y 4. Así, se confirmó que poseían las especificidades deseadas. Se demostró que los tres anticuerpos eran compatibles para su uso en aplicaciones de inmunopulldown e inmunoensayos.